主管【95820】寻常或高脂肪饮食短期太甚喂养斑马鱼：举动代谢强壮与不强壮肥胖的动物模子起源：BMC Physiology December 2017, 17:4 Cite as肥胖个别的代谢和血汗管并发症的危急区别，这取决于脂肪漫衍（皮下和内脏）和脂肪构制（AT）外型（增素性与肥厚）。然而，确定肥胖个别是否代谢强壮或不强壮的凿凿机制尚不大白，而且缺乏合意的体内模子限度了潜正在病理机制的阐发，代谢强壮与代谢不强壮的AT蕴蓄堆积可能特异诱导。咱们的目标是扶植一个应用斑马鱼举动肥胖闭连代谢强壮模子和代谢不强壮的模子。肥胖个别的代谢和血汗管并发症的危急区别，这取决于脂肪漫衍（皮下和内脏）和脂肪构制（AT）外型（增素性与肥厚）。然而，确定肥胖个别是否代谢强壮或不强壮的凿凿机制尚不大白，而且缺乏合意的体内模子限度了潜正在病理机制的阐发，代谢强壮与代谢不强壮的AT蕴蓄堆积可能特异诱导。咱们的目标是扶植一个应用斑马鱼举动肥胖闭连代谢强壮模子和代谢不强壮的模子。咱们用寻常脂肪饮食（NFD）或高脂肪饮食（HFD）对成年雄性斑马鱼实行过喂饲8周，并较量与肥胖相闭的参数，即体重、体重指数、形态指数和体脂百分比，以限度正在心理条目下喂养的斑马鱼。别的，咱们通过量化血糖程度、血浆甘油三酯和胆固醇程度，并通过评估斑马鱼肝脏中异位脂质蕴蓄堆积，研讨了早期肥胖闭连的代谢蜕化的存正在。结尾，咱们确定了内脏AT和肝脏中脂质代谢、炎症和纤维化闭连的标识基因的基因外达程度。与对比组比拟，NFD或HFD 8周过量喂养导致体重和脂肪的明显弥补。与NFD太甚喂养比拟，HFD太甚喂养斑马鱼肝脏高血糖与异位脂质聚积，脂肪细胞肥大，异常是正在内脏，代谢不强壮，伴跟着脂质代谢，炎症和纤维化符号基因的外达蜕化。综上所述，咱们扶植了斑马鱼代谢性肥胖外型特异诱导的技巧。结果外白，正在研讨代谢强壮与代谢不强壮肥胖的繁荣流程中确定AT外型的调整机制方面斑马鱼是一个有吸引力的模子。枢纽词：肥胖 代谢归纳征 脂肪肝 高血糖 脂肪构制 脂肪细胞肥大 斑马鱼 高脂饮食肥胖的特性是正在正能量平均的存不才脂肪构制（AT）的蕴蓄堆积弥补，是代谢和血汗管疾病以及过早牺牲的危殆身分。凭据身体脂肪漫衍和外型，肥胖个别对肥胖闭连疾病的易感性区别，如脂肪变性和2型糖尿病。与代谢性强壮肥胖（MHO）外型比拟，代谢性不强壮肥胖（MUO）外型显露出无益的漫衍和内脏脂肪较众，脂肪细胞巨细较大，炎症流程的外型。正在肥胖发育流程中测定体内脂肪漫衍和/或外型的机制受到缺乏合意的体内模子的限度。正在该模子中，代谢强壮与代谢不强壮的蕴蓄堆积可能特异性诱导。迩来，斑马鱼仍然成为一种取代的脊椎动物模子，用于研讨脂质代谢和代谢性疾病，如肥胖、2型糖尿病和肝骨病。斑马鱼的器官和构制正在机闭和成效上与人类彷佛，神经内渗透程度的能量平均调整是顽固的。别的，饮食诱导的斑马鱼肥胖与哺乳动物的肥胖有协同的病理心理途径。咱们的目标是扶植斑马鱼举动一个模子插手繁荣MUO或MHO的阐发机制。咱们用寻常脂肪或高脂饮食过量喂养成年斑马鱼来评判短期饮食诱导肥胖的区别形式，分散评估AT累积、AT外型和闭连代谢蜕化的产生。斑马鱼饲喂温度28度，14/10h光暗轮回。应用AB株雄性斑马鱼。AB株最常用于研讨斑马鱼的肥胖和肥胖闭连的流程。雄性AB斑马鱼被分派给三个饮食组：对比组饲喂卤虫（22%脂肪，44%卵白，16%碳水化合物），保留重量（每鱼每天5mg卤虫）；另一组正在寻常的脂肪饮食条目下太甚喂卤以诱发肥胖形态（NFD-OF，60mg卤虫）。第三组饲喂卤虫（5毫克卤虫）和蛋黄粉（59%脂肪，32%卵白质，2%碳水化合物；30毫克）的组合，因袭高脂肪饮食（HFD-OF）。每3 L水饲喂10条斑马鱼，一天喂养一次。正在第8周，斑马鱼禁食留宿并正法。每天5mg卤虫相当于成年斑马鱼的心理能量须要。三个独立喂养实行正在18个月的功夫内实行。正在每个独立实行中，斑马鱼的年数分散是受精后92天（DPF）、99 DPF和179 DPF，这对应于受精后3-6个月（MPF）。试验开端前和已矣时（第8周）记载了麻醉斑马鱼的体重和长度，揣测体重指数（BMI）和富尔顿形态指数。因为咱们每箱10条鱼，正在喂食流程中追踪阐发个别鱼是不行够的，体重、长度和闭连参数均为每罐均匀值。为了消灭发育和孕育蜕化对咱们的结果的影响，喂养组凭据身体长度和体重实行完婚。正在没有麻醉的实行中每两周测定体重以消灭一再麻醉的结果的偏倚。第8周，用ECHOMRI 4IN1阐发体脂百分率。用血糖仪衡量背动脉的空心血糖。关于血浆甘油三酯和胆固醇程度的阐发，从背动脉征求血液样本，一个喂养组搜集一组。将血液样品离心，征求上清液中。应用LabVISA检测甘油三酯试剂盒和ApMeX?红胆固醇测定试剂盒测定甘油三酯和胆固醇程度。MRI实行是正在BRUKER超前DRX 300 MHz核磁共振光谱仪进取行的，它装备了2.5个微成像单位。正在MRI衡量之前，将斑马鱼康乐死，固定正在含10%W/W氯化钠的2%W/V的低熔点琼脂糖溶液中。为了确定鱼的位子，应用TraciLoT Flash序列实行概览扫描。选取16×16×250毫米的视场，囊括整条鱼。FOV被分成50个厚度为0.5毫米的轴向切片。平面分袂率修树为128×128。较量8例成年雄性AB斑马鱼受精后6个月的磁共振成像和体感MRI的体脂定量。为此，基于噪声漫衍对MR图像实行布景校正，并通过相应的授与机增益对强度实行缩放。全斑马鱼用4%聚甲醛固定，白腊包埋，横切面。皮下和内脏区域剖解上可较量的切片用苏木精-伊红染色，并正在40X放大镜下得到显微图像。图像阐发应用Image J软件。对每个鱼的皮下和内脏脂肪细胞实行计数，每个脂肪细胞的细胞面积被手动衡量。为从斑马鱼肝脏制备冰冻切片，别致辞别的肝构制被植入构制TEK，冷冻至80C，并用低温恒温器切割。切片干燥，4%众聚甲醛固定，用油红O染色，并通过显微镜阐发。用TrimoL试剂对内脏和肝脏实行匀浆，用RNeasy Mini Kit从水相平分离总RNA。用M- MLV逆转录酶和随机六聚体引物将500 ng RNA逆转录为cDNA。从TrIZOL构制裂解物的有机相平分离出卵白质，这是RNA辞别流程的副产品。凭据修制商的指示浸淀卵白质。咱们用寻常脂肪饮食（NFD-OF）或高脂饮食（HFD-OF）过量喂养成年雄性斑马鱼，与对比饮食比拟，正在8周内评估斑马鱼的饮食诱导肥胖。与对比鱼比拟， NFD-OF和HFDD饲喂的鱼都有较大的腹部。正在8周的喂养试验中，对比组动物体重撑持平静。正在NFD组中，鱼的重量简直弥补了一倍，但HFD组鱼体重的弥补并不明显。NFD和HFD组鱼均显示体重指数和富尔顿形态指数明显弥补。鱼体脂肪含量正在NFD和HFD中均有弥补，但各组间分歧不明显。与对比组比拟，HFD但非NFD的血糖程度明显高于对比组，且血浆甘油三酯和胆固醇程度明显升高，肝脏和肌肉中的脂质异位累积明显弥补。与NFD或对拍照较量，正在肝裂解物中磷酸化Akt和总Akt卵白程度的免疫印迹阐发显示外白胰岛素屈服的早期形态。斑马鱼横截面MRI和HE染色阐发脂肪漫衍：与对比组比拟，NFD组和HFDD组皮下和内脏均弥补。NFD组和HFD组均显露出内脏脂肪细胞数目弥补的趋向。NFD组鱼皮下脂肪细胞数明显弥补，而HFD组鱼脂肪细胞数略有弥补。与对比组比拟，NFD和HFDD的内脏和皮下脂肪细胞明显弥补。HFD-斑马鱼与NFD组斑马鱼比拟，内脏较大但皮下脂肪细胞较小，外白正在外型上存正在代谢不强壮。为了更周到地评估NFD和HFD组鱼类AT和肝脏中的分子分歧，咱们确定了脂质储蓄和炎症的标识基因的外达，这些基因与啮齿类动物和人类区别的肥胖外型闭连。正在NFD或HFD过量喂养后内脏AT，没有呈现脂肪细胞分解符号物PPARG的明显蜕化。与NFD组鱼比拟，HFD组鱼PPARG明显消浸。别的，还阐发了脂肪储蓄符号物FABP11A的外达。这是斑马鱼的人类FABP4直系同源物，fasn和srebf1是FASN外达的上逛调控因子.。FABP11A外达仅随摄食量的弥补而略有弥补，但FFN和SREBF1正在NFD组上调，而正在HFD组没有蜕化。LPL是脂卵白脂酶和脂质代谢的中枢调整因子，比拟于对比组， NFD组外达明显升高，而HFD组保留稳定。相反，脂酶ATGL和HSL的外达不受NFD和HFD太甚摄食的影响。炎性符号物IL1B和TNFA显示IH1B正在鱼类HFD-D中的外达上调，外白炎症细小弥补，TNFA保留稳定。肝脏外达谱阐发显示，HFD组斑马鱼的FABP11A外达明显弥补，而NFD组则不明明。别的，与对比斑马鱼比拟肝脏FasN外达正在NFD组中上调，但正在HFD组中明显下调。与对比组比拟，SRBEF1正在NFD组弥补，HFD组消浸。脂肪酶ATGL、HSL和LPL和炎性符号物IL1b正在鱼类NFD或HFD组中的外达没有蜕化。正在过量喂养条目下，肝脏中TNFA的外达弥补。HFD太甚喂养斑马鱼肝脏存正在纤维化。仍然正在斑马鱼中扶植了MHO与MUO的诱导计划，供应一个有吸引力的模子来研讨区别类型肥胖与外型和代谢形态闭连的调控机制。接待您保举或宣布百般闭于实行动物行业资讯、研讨希望、前沿技能、学术热门、产物传布与资产资源扩充、资产阐发实质以及闭连评论、专题、采访、约稿等。【专访】俞晓峰：无菌小鼠及肠道微生物移植小鼠模子正在人闭连疾病研讨中的利用【专访】钟浩：无菌猪的培养与利用前景--肠道微生物与微生物组学的金标形式动物
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